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【央视新闻客户端】
文化知识分享: TAB去除多糖成分一:仪器:同方法一 二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇三:操作 1.5ml 对数生长期细菌细胞 离心,5000rpm,1min 沉淀 溶于500μl TE缓冲液中混匀 30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混匀,37℃,1小时 100μl NaCL(5M) 混匀 80μl的CTAB/NaCL,*混匀;65℃ 10min(可不做) 加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心12000rpm,4-5min 取上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。注意 1,*此步操作后,离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M,否则DNA将与CTAB共沉淀。 2,本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品,通过此流程,可以获得较为完整的DNA分子。
一、实验原理
真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中,SDS可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase的 活性;而蛋白酶K可将 蛋白质降解成小肽或氨基酸,使DNA分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂
1. 仪器:
恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计(GeneQuant)、移液器、玻璃匀浆器、离心管(灭菌)、吸头(灭菌)
2. 试剂:
(1)细胞裂解缓冲液:
Tris (pH8.0) 100 mmol/L
EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L
NaCL 20 mmol/L
SDS 10%
胰RNA酶 20ug/ml
(2) 蛋白酶K: 称取20mg蛋署、同落实、同检查、同考核。坚决克服机关党建工作"说起来重要,干起来次要,忙起来不要"的现象,切实在机关各项活动中突出党组织的政治核心作用和党员的先锋模范作用,形成良好的"党建意识"。
三要把调查和研究相结合,在探索和把握机关党建工作的内在规律上下功夫。面对全面建设小康社会的新形势,机关党建一些传统的思维方式、领导方式和工作方式已难以适应新的要求。这就要求我们本着"在继承中创新、在改革中发展"的理念,下沉精力到基层单位、到实际中去,搞好调查研究,了解方方面面情况,掌握第一手资料,不断总结经验,科学分析和正确估量党建面临的新情况,探索和创新机关党建工作的新思路、新办法、新途径,不断增强机关党建工作的针对性、实效性、科学性。
四要把典型示范与面上拓展相结合,形成以点带面、点面结合的机关工作格局。一个好的典型,就是一面旗帜。先进典型对部门和单位的发展有着很好的示范和榜样作用。机关党建工作要善于发现典型,培养典型,用典型推动工作。在党内营造一种前有标兵,后有追兵,相互学习,相互促进的良好风气。
实现四个突破
一要突破就党建抓党建的旧框框,坚持点面相结合。把机关党建工作放到加强党的执政能力建设中来定位,放到市场经济的宏观背景中去谋划,放到国土资源管理工作大局中去研究,放到推动部中心工作中来部署,切实树立围绕中心抓党建,抓好党建促中心的工作思路。通过把党建工作这?"点"的内涵挖掘好,进而推动国土资源管理事业这个"面"上的工作。
二要突破自我封闭、自我循环的小圈子,坚持走出去与请进来相结合。新形势下,机关党建工作的视野要从"一区一域"中解放出来,跳出机关看机关,着眼全局抓党建,按照统筹兼顾、全面协调可持续发展的要求改进机关党建工作,充分利用和整合各种资源,紧密结合行政业务工作的重点、难点和干部职工关注的热点、焦点问题找准突破口,拓展机关党建工作新领域,扩大机关党建工作覆盖面。
三要突破党建工作是务虚的思想模式,坚持务虚与务实相结合。要坚持党建工作与行政业务工作同部署、同落实、同检查、同考核,相互促进,把党建工作的新成果、新经验融入到依法行政的具体实践中,在狠抓工作落实、强化督促检查上下功夫,求实效。坚持虚功实做,切实将文明单位创建活动的成果体现到解决实际问题上来,体现到为民、务实、清廉上来。
四要突破党建工作主要靠经验、靠传统、靠教育的旧套路,坚持继承与创新相结合。发展是最好的坚持,创新是最好的继承。既要坚持机
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